雙光束紫外可見分光光度計當(dāng)以空白試劑為參比調(diào)節(jié)儀器零點時，比色皿窗材料的吸收、內(nèi)外窗面的散射以及溶劑的吸收等都被抵消，所得吸光度值*由顯色溶液中待測離了濃度所決定。此時吸光度值與試液濃度一般呈線性關(guān)系。吸光度值與測定濃度不成直線關(guān)系，發(fā)生向下彎曲(負偏離)或向上彎曲(正偏離)的現(xiàn)象而偏離朗伯一比爾定律的主要原因如下。

　　(1)非單色光的影響 雙光束紫外可見分光光度計使用連續(xù)光源和分光器分光，不可能得到真正理想的單色光；為保證在測量中能得到充分的光強，儀器必須保持一定的狹縫寬度。由狹縫射出后投射到被測物質(zhì)上的光，是一個有限寬度的譜帶——光譜通帶。隨光譜通帶寬度的增大，吸收光譜的分辨率降低，并偏離朗伯一比爾定律。

　　(2)非吸收光的影響 當(dāng)來自出射狹縫的光的光譜通帶寬度大于吸收光譜譜帶時，投射在被測物質(zhì)上的光就含有非吸收光。這不僅能使靈敏度降低，且能使校準(zhǔn)曲線向橫坐標(biāo)軸彎曲而偏離朗伯一比爾定律。

　　(3)非平行光的影Ⅱ向 當(dāng)入射光與比色皿的光學(xué)面不垂直時，通過被測物質(zhì)的實際光程就大于比色皿的厚度。這種情況所造成的影響很小，一般可忽略不計。

　　(4)散射的影響 雙光束紫外可見分光光度計當(dāng)被測物質(zhì)不均勻，其巾含有微小顆粒物，如懸浮物或膠態(tài)粒子等散射質(zhì)點時，入射光通過該物質(zhì)就會使部分光被散射而損失，從而減小了透射光的性度，增大了實際吸光度，導(dǎo)斂偏離朗伯一比爾定律。

　　(5)熒光的影響 某些物質(zhì)吸收光后能再新輻射出波長和入射光波長相近的熒光而導(dǎo)致朗們一比爾定律失效。

　　(6)化學(xué)反應(yīng)的影響 在被測溶液中待測組分發(fā)發(fā)生解離、締合、光化等作用，或與溶劑相互作都將使待測組分的吸收曲線發(fā)生明顯的改變，如吸收峰的形狀、位置、強度以及精密結(jié)構(gòu)都會發(fā)生變化，從而導(dǎo)致偏離朗伯一比爾定律。

　　(7)溶劑的影響 雙光束紫外可見分光光度計溶劑對吸收光潛在的影響頗為要。幅射能引起某化合物的分解而導(dǎo)致偏離朗們比爾定律。